PMD18-T-Vector是一种科研中常用的质粒载体,专门用于高效克隆PCR产物。该载体基于pUC18载体改建而成,具有pUC18的多克隆位点,且在pUC18载体的XbaI和SalI识别位点之间插入了EcoRV识别位点,使得通过EcoRV酶切后在3’端添加“T”,适应了耐热性DNA聚合酶在PCR产物3’末端添加“A”的特性。因此,使用PMD18-T-Vector可以显著提高PCR产物的连接和克隆效率。此外,它还包括一种高效的连接液SolutionI,可以在约30分钟内完成连接反应,连接液可以直接用于细菌转化,方便实验操作。
在产品说明中,列出了pMD18-T-Vector的详细信息,包括制品说明、制品内容、保存方式、纯度、用途、实验操作、相关说明、使用注意事项以及常见问题解答(Q&A)。制品内容部分提及了pMD18-T-Vector本身以及ControlInsert(作为对照插入片段使用)和SolutionI。制品需要在-20℃下保存,并且要求在使用时需在冰中融化。
对于pMD18-T-Vector的结构和连接位点也进行了说明,包括了Cloning site、BcaBEST Sequencing Primer、M13-47 binding site、BcaBEST Sequencing Primer RV-M binding site、LacZ operator、ColE1 ori以及Amp r等关键区域。这些特定的序列和区域在载体结构中发挥着重要作用,如用于克隆、DNA测序、酶切反应等。
在实验操作部分,提供了详细的操作方法用于Control DNA片段的克隆实验、一般DNA片段的克隆实验和一种可供选择的快速克隆法。这些操作步骤包括溶液配制、连接反应条件、转化感受态细胞的步骤、细菌培养及单菌落的挑选和验证等。实验要求在特定的温度下进行连接反应,同时提供了不同条件下反应效率的注释,如在室温和缩短反应时间的条件下连接效率会有所下降,对于长片段PCR产物建议延长连接反应时间至数小时。
对于实验操作中提及的控制插入片段,实验结果表明,使用ControlInsert进行连接/转化后,白色菌落中含有目的DNA插入片段的效率很高。此外,对于克隆后的PCR产物,可以使用BcaBESTTM Sequencing Primers、M13 Primers进行DNA测序。
PMD18-T-Vector的使用注意事项包括了使用时的温度要求、连接时间、转化效率影响因素等,确保实验的准确性和效率。Q&A部分提供了对于在实验中可能遇到问题的一些解决方法和建议,帮助科研人员解决实验中可能遇到的问题。
2025-05-07 23:05:50
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