往复式逐行扫描是一种提高激光共焦扫描显微成像帧速的有效方式, 然而随着帧速的提高, 这种扫描方式在图像重构时会带来更严重的图像错位。根据高速振镜运动特性, 分析了激光共焦高速扫描显微成像系统逐行扫描下的重构图像错位原理, 设计了基于形态学梯度的重构图像错位评价算法, 并且结合搜索错位评价最小点的单目标约束粒子群算法实现了重构图像错位校正。经实验验证, 该算法适用于成像帧速高达300 frame/s的重构图像错位校正; 与未进行错位校正的图像相比, 校正后的成像分辨率提高了68.83%, 同时该算法能够适用于不同振镜搭配方式和不同扫描帧速的图像重构。