如果你做real time PCR 的仪器是ABI 公司，设计引物时一定要用ABI 引物设计软件primer express，primer express 3.0当前最优秀的RT-PCR引物设计软件

引物设计在PCR实验方案设计中是非常重要而且常用的，掌握引物设计决定实验成败

背景：多重PCR定义为在一根试管中使用不止一个引物组（包含正向引物和反向引物）同时扩增DNA模板的多个区域，已被广泛用于临床和环境微生物学研究中。 然而，用于多重PCR的引物设计仍然是一个有挑战性的问题，需要考虑几个因素。 这些问题包括由于与非目标DNA模板的非特异性结合导致的引物错误，引物二聚化以及无法分离和纯化具有相似电泳迁移率的DNA扩增子。 结果：开发了一个名为MPprimer的新程序，以帮助用户设计具有高度可靠性的多重PCR引物组。 它使用广泛使用的引物设计程序Primer3和引物特异性评估程序MFEprimer，根据基因组或转录本DNA数据库设计和评估候选引物，然后仔细检查以避免引物二聚化。

Real-time PCR 引物设计强大工具

在当今分子生物学研究中，PCR技术已成为使用最多，最广泛的技术之一。而引物设计是PCR技术中至关重要的一环。在PCR扩增以前，一般模板序列已被全部或部分确定。要想扩增出理想的目的片断，一般都得通过正确设计PCR引物。也有的人不经过设计直接取模板序列的两个片断作为引物，这样很可能导致实验失败，如扩增出多条带（引发错配所致），不出目的带或出目的带很弱（引物引发效率低下），引物二聚体带（引物与引物之间形成稳定二聚体）等等。 现在PCR引物设计都通过计算机软件进行。生物信息学发展至今日，具有引物设计功能的软件有很多，其中大部分是免费软件，可直接从网上下载，安装并运行。这类软件大都简单易用，但其引物设计功能一般不很强，通过它们设计的引物常常不尽如人意，而专门进行引物设计的商业版软件功能强大，但使用起来不太容易。本文就这一问题进行探讨。

超好用的引物设计软件

A41770医学 多重聚合酶链式反应多重PCR引物遗传算法设计实现.doc