较为详细的讲述了荧光定量PCR从实验一开始到最后的数据处理过程，并有实例指导，希望对广大虫友有所帮助！

在当今分子生物学研究中，PCR技术已成为使用最多，最广泛的技术之一。而引物设计是PCR技术中至关重要的一环。在PCR扩增以前，一般模板序列已被全部或部分确定。要想扩增出理想的目的片断，一般都得通过正确设计PCR引物。也有的人不经过设计直接取模板序列的两个片断作为引物，这样很可能导致实验失败，如扩增出多条带（引发错配所致），不出目的带或出目的带很弱（引物引发效率低下），引物二聚体带（引物与引物之间形成稳定二聚体）等等。 现在PCR引物设计都通过计算机软件进行。生物信息学发展至今日，具有引物设计功能的软件有很多，其中大部分是免费软件，可直接从网上下载，安装并运行。这类软件大都简单易用，但其引物设计功能一般不很强，通过它们设计的引物常常不尽如人意，而专门进行引物设计的商业版软件功能强大，但使用起来不太容易。本文就这一问题进行探讨。

PCR时间轴计算器

你在为PCR实验苦恼吗?

官方版软件，免费授权，安装即用；各位需要学习和进行荧光定量和简单数据分析的可自行下载学习；严禁用于商业用途；

磁性富集和巢式PCR检测铜绿假单胞菌

超好用的引物设计软件

Data1.cab补充文件

JJF1527-2015聚合酶链反应分析仪校准规范.pdf

①在Tm值允许范围内，选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。